青鳉是一群属于鳉形目(Cyprinodontiformes)、大颌鳉科(Adrianichthyidae)、青鳉属(Oryzias), 广泛分布于西太平洋地区大陆及岛屿淡水及海滨区域的小型鱼类, 迄今已记述的物种达33种^[1]。在中国已记述过的物种共有5种。早期记述的分别为中华青鳉(Oryzias sinensis)、小青鳉(Oryzias minutillus)、弓背青鳉(Oryzias curvinotus)。过去认为日本青鳉(Oryzias latipes)在中国广泛分布, 但后来确认为中华青鳉误记^[2], 日本青鳉在中国是否有分布尚存疑问。因此, 《中国动物志·硬骨鱼纲·鳉形目》仅收录了前3种。鳍斑青鳉(Oryzias pectoralis)虽然早在20世纪60年代在广东北江流域就为国内学者所接触, 但当时将其记述为日本青鳉^[3], 直到近年才被确切记述^[4], 且在广西靖西区域也发现其种群^[5]。因此, 目前中国能够确认的青鳉物种应为4种。

鳍斑青鳉在中国主要分布在广东、广西等区域, 国外主要分布在老挝等区域^[6]。除小青鳉局限分布在云南南部几个边境县市外, 中华青鳉等物种在中国均有较为广泛的分布。在珠江流域, 中华青鳉、鳍斑青鳉及弓背青鳉均有分布。中华青鳉主要分布在珠江流域上游, 如异龙湖、弥勒^[2]、沾益西河等, 曾与珠江流域关联, 但现代已归属于金沙江流域的滇池区域也有分布, 且为其模式标本产地^[2]; 鳍斑青鳉主要分布在北江上游及其支流, 桂林、靖西也具有种群分布; 而弓背青鳉主要分布在珠江三角洲水网, 直至沿海区域^[4]。中华青鳉在长江流域及以北地区、甘肃河西走廊及新疆广大区域有分布, 但西北地区种群多被认为是引入种群。随着外来入侵种食蚊鱼(Gambusia affinis)的广泛入侵, 许多学者经验性认为中国青鳉鱼类种群较历史已显著下降, 叠加栖息生境的破坏, 局部种群出现灭绝^{[2, 4, 7-8]}, 食蚊鱼对青鳉仔鱼的捕食可能是食蚊鱼危害青鳉鱼类种群主要机制, 但目前尚缺少足够的实证性证据。在面临食蚊鱼入侵捕食压力情况下, 青鳉仔鱼行为与生态学响应是否有效是影响其生存机会高低的重要因素。因此, 对青鳉仔鱼, 特别是处在敏感期的初孵仔鱼发育、形态及行为等诸方面了解将能够为阐明食蚊鱼捕食青鳉仔鱼机制及青鳉仔鱼的响应策略提供重要基础, 也能为制定青鳉鱼类保育策略提供重要帮助。

另一方面, 仔鱼发育与形态是鱼类早期生活史重要研究内容^[9-12]。在青鳉鱼类中, 仔鱼形态特征是物种鉴别的重要依据之一^[13-14]。同时, 由于青鳉鱼类在水生态毒理学及发育生物学研究上的广泛应用, 其胚胎及仔鱼的发育也是重要研究内容之一^[15-16]。目前, 人们对中国境内的青鳉鱼类生物学及生态学的了解仍十分有限。本文针对珠江流域及其邻近区域3种青鳉鱼类初孵仔鱼发育及形态特征进行了研究, 为中国境内青鳉鱼类分类整理及保育研究进一步积累资料, 同时也为深入开展食蚊鱼入侵对青鳉鱼类生态学危害及作用机制研究奠定基础。

弓背青鳉亲本2017年2月采集于广东省广州市南沙区南沙街道南沙岛黄山鲁森林公园东侧溪流, 生境描述详见参考文献所述^[4]。中华青鳉亲本2017年3月采集于云南省昆明市西山区团结乡花红园, 该地为该物种模式标本产地, 生境描述详见参考文献所述^[8]。鳍斑青鳉亲本2006年采集于广东省韶关市曲江区南华漕溪(24°38′21.83″E, 113°38′3.54″N)及其下游北江白沙镇段(24°37′36.62″E, 113°30′28.60″N), 在实验室形成养殖种群。实验期间, 亲鱼均养于西南林业大学国家高原湿地研究中心湿地生态学研究实验室控温自净循环玻璃水族箱内(长100 cm×宽40 cm×高60 cm), 每天投喂足量的摇蚊幼虫干粉。

实验期间密切观察水族箱内亲鱼产卵情况, 雌鱼出现挂卵后将其捞出, 取出鱼卵。随后将鱼卵转移入恒温水浴箱内培育。水浴温度为(27.0± 1.0)℃。培养期间每天换水一次, 保持胚胎发育环境清洁。

各种仔鱼孵化后即对其进行发育特征及形态观察、测量(仔鱼孵化后2 h内用于观察, 且同一批次仔鱼只对最先孵化第1天内的仔鱼进行观察, 其后孵化仔鱼不再观察)。形态测量以体视显微镜进行, 利用目镜测微尺对可量性状测量。观察时, 带水活体对仔鱼背侧色素进行计数(从胸鳍起点至尾索), 对发育程度及形态进行记述。随后将仔鱼转移至1.5 mL离心管, 带清水0.5 mL, 后加入1 mL 5%福尔马林作初步固定, 10~15 min后取出置入清水稍作洗涤, 进行外部形态指标的测量(图 1)及肌节数目计数。固定时间不足及过长均会影响对肌节的计数观察。观察结束后将仔鱼转移回离心管保存以备复检。

图 1(Fig. 1)

图 1 青鳉鱼类仔鱼形态测量示意[13] ①体全长; ②肛前长; ③肛后长; ④头长; ⑤眼径; ⑥头高; ⑦体高; ⑧卵黄短径; ⑨卵黄长径. Fig.1 Morphological measurements of Oryzias larvae[13] ① total body length; ② pre anal length; ③ anal length; ④ head length; ⑤ eye diameter; ⑥ head depth; ⑦ body depth; ⑧ yolk depth; ⑨ yolk length.

所得数据均利用SPSS 19.0进行分析。采用单因素方差分析(ANOVA)及最小显著差异法(least significant difference, LSD)多重比较方法对仔鱼间各形态参数的差异显著性进行分析。分析时, 部分可量性状在分析前与体长或头长作比, 以比例值进行数据分析, 以消除各可量性状参数因体长依赖所引起的系统误差。

利用多元统计方法主成分分析、判别分析及系统聚类等对仔鱼间的形态性状差异进行深入分析(共20组可量性状及比例参数), 以确认仔鱼间的形态性状差异及形态相似性。更进一步利用Primer 7.0对初孵仔鱼间的形态相似性进行统计检验, 以P < 0.05为显著水平, 根据R值大小判别分离程度: R > 0.75, 完全分离; 0.5 < R≤0.75, 少量重叠但仍明显分离; 0.25 < R≤0.5, 存在明显重叠但仍部分分离; R≤0.25, 重叠明显几乎不可分^[17]。

中华青鳉、鳍斑青鳉、弓背青鳉初孵仔鱼发育特征十分相似(表 1, 图 2~图 4)。具有指示性的17个观察特征中, 三者区别并不十分显著(表 1)。初孵时, 所有仔鱼鳔均未见充气, 耳石2对, 胸鳍可活动, 内无鳍条, 均为宽圆扇形的鳍膜。体表亮黄色到淡黄色, 多色素, 口裂形成, 可动; 眼可动; 消化道初步贯通。初孵或孵化后数小时内可平游, 已初步具备初次摄食生理条件基础。具鉴别意义的体表形态发育特征主要是色素的分布形式:以腹部大血管上色素分布形式可区别中华青鳉与鳍斑青鳉、弓背青鳉初孵仔鱼。中华青鳉初孵仔鱼腹部色素明显沿血管分布, 紧密、色黑, 其标本固定后分布形态仍清晰可辨, 而后两者分布散乱、疏落(表 1, 图 3)。以胸鳍膜上点状色素花多寡可区分鳍斑青鳉、弓背青鳉。鳍斑青鳉胸鳍膜上点状色素花多, 为8~20朵; 而弓背青鳉胸鳍膜点状色素花极少, 甚至无, 为0~3朵。二者区分明显。更为深入的形态分析可以在三者间找到更多的区分指标(表 2)。

表 1(Tab.1)

表 1 3种青鳉仔鱼发育特征比较 Tab.1 Developmental characteristics of three Oryzias species hatching larvae 发育特征 developmental characteristics 中华青鳉Oryzias sinensis 鳍斑青鳉Oryzias pectorali 弓背青鳉Oryzias curvinotus 体色body color 从背至腹, 体淡黄色至透明。头部浅黄, 色素多, 点状与星斑状色素花交错分布。 从背至腹, 体呈亮黄色至透明。头背部亮黄色显著, 色素多, 浓黑, 点状与星斑状色素花交错分布, 鳔部尤其浓密。 从背至腹, 体淡黄色至透明。头部浅黄, 色素呈淡灰黑色, 疏落。 头head 平直, 灵活。 平直, 灵活。 多未平直, 头部尚弯向卵黄囊。 眼eye 可动。 可动。 可动。 口裂oral fissure 形成; 开合自如。 形成; 开合自如。 形成; 开合自如。 鳔air bladder 未充气。孵出后1 h内充气。 未充气。 未充气。 耳石otolith 2对。 2对。 2对。 胸鳍pectoral fin 可摆动; 扇形鳍膜。胸鳍膜上点状色素花疏落, 5~10朵。胸鳍基部左右各可见1色素点。 可摆动; 扇形鳍膜。胸鳍膜上色素花多, 细密, 8~20朵。胸鳍基部未见点状色素花。 可摆动, 长至头后腹部4/5处(第6肌节); 扇形鳍膜。胸鳍膜上点状色素花极少, 细密, 0~3朵。胸鳍基部未见点状色素点。 鳍褶fin fold 背鳍褶起于第15肌节处; 腹鳍褶起于腹部后部、肛门下凹处, 其后至尾及绕背与背鳍褶连贯。 背鳍褶起于第15肌节处; 腹鳍褶起于腹部后部、肛门下凹处, 其后至尾及绕背与背鳍褶连贯。 背鳍褶起于第15肌节处; 腹鳍褶起于腹部后部、肛门下凹处, 其后至尾及绕背与背鳍褶连贯。 尾部tails 尾索直; 未见尾鳍条, 尾索斜下侧原基可见, 血流贯通。可见4~6点淡色素花。 尾索直; 尾索斜下侧已见2~3条鳍条, 血流贯通。可见斜后下两丛扇形色素花。 尾索直; 未见尾鳍条, 尾索斜下侧原基可见, 血流初步贯通。无, 或仅少数(2~3点)淡色素花。 肛门vent 可见, 第9~10肌节处。 可见; 第9~10肌节处。 可见; 第9肌节处。 肠道guts 初步贯通。 初步贯通。 初步贯通。 胆囊gallbladder 可见, 极浅黄绿色。 可见, 极浅黄绿色。 可见, 淡黄绿色。 脾spleen 粉红色, 点块状, 鳔充气后位于鳔的左侧。 粉红色, 点块状, 鳔充气后位于鳔的左侧。 鲜红色, 点块状, 鳔充气后位于鳔的左侧。 卵黄囊yolk sac 大; 占腹部大部; 体积(0.11±0.05) mm3 大; 体积占腹部大部; 体积(0.12± 0.03) mm3。 大; 体积占腹部大部; 体积(0.19± 0.09) mm3。 腹部油球oil globule 1个; 陷入卵黄囊, 腹部底部中央。 1个, 陷入卵黄囊, 腹部底部中央。 1个, 陷入卵黄囊, 腹部底部中央。 背部色素chromatophore pigments in back 细密, 数量多, 点与星斑状色素花交错。 呈圆点, 较为疏落, 点状色素花多。 呈圆点, 较为疏落, 星斑状色素花为主。 腹血管色素chromatophore pigments cobove abdomen vessel 沿大血管分布, 黑、密。 未见明显沿大血管分布, 较为散乱, 色淡。 未见明显沿大血管分布, 较为散乱, 色淡。

表 1 3种青鳉仔鱼发育特征比较 Tab.1 Developmental characteristics of three Oryzias species hatching larvae

图 1(Fig. 1)

图 2 青鳉鱼类活体初孵仔鱼形态 (a)中华青鳉; (b)鳍斑青鳉; (c)弓背青鳉. Fig.2 Morphology of three Oryzias species alive hatching larvae (a) Oryzias sinensis; (b) Oryzias pectoralis; (c) Oryzias curvinotus.

图 1(Fig. 1)

图 3 青鳉鱼类初孵仔鱼腹部形态(5%福尔马林固定) (a)中华青鳉; (b)鳍斑青鳉; (c)弓背青鳉. Fig.3 Morphology in abdomen of three Oryzias species hatching larvae (fixed by 5% formalin solution) (a) Oryzias sinensis; (b) Oryzias pectoralis; (c) Oryzias curvinotus.

图 1(Fig. 1)

图 4 青鳉鱼类初孵仔鱼侧面形态(5%福尔马林固定) (a)中华青鳉; (b)鳍斑青鳉; (c)弓背青鳉. Fig.4 Lateral morphology of three Oryzias species hatching larvae (fixed by 5% formalin solution) (a) Oryzias sinensis; (b) Oryzias pectoralis; (c) Oryzias curvinotus.

表 2(Tab.2)

表 2 3种青鳉鱼类仔鱼形态性状差异比较 Tab.2 Morphological measurements among three Oryzias species hatching larvae 测量参数 measurement 中华青鳉 Oryzias sinensis (n=36) 鳍斑青鳉 Oryzias pectorali (n=28) 弓背青鳉 Oryzias curvinotus (n=33) 差异显著性significance (P < 0.05) 体全长/mm total body length (TL) 4.04±0.19b 4.64±0.18a 3.88±0.17c F2, 94=147.810, P=0.000 肛前长/mm pre anal length (PAL) 1.81±0.07b 2.11±0.09a 1.71±0.09b F2, 94=182.820, P=0.000 肛后长/mm anal length (AL) 2.22±0.14b 2.53±0.11a 2.17±0.12c F2, 94=71.965, P=0.000 头长/mm head length (HL) 0.82±0.05b 0.93±0.06a 0.79±0.02c F2, 94=73.408, P=0.000 头高/mm head depth (HD) 0.55±0.03 0.57±0.04 0.55±0.04 F2, 94=1.633, P=0.201 体高/mm body depth (BD) 0.69±0.07b 0.70±0.06b 0.78±0.08a F2, 94=14.828, P=0.000 眼径/mm eye diameter (ED1) 0.37±0.02b 0.42±0.02a 0.37±0.02b F2, 94=49.244, P=0.000 眼间距/mm eye distance (ED2) 0.65±0.05a 0.69±0.05a 0.64±0.02b F2, 94=12.648, P=0.000 口宽/mm mouth width (MW) 0.29±0.02a 0.30±0.02a 0.25±0.01a F2, 94=71.338, P=0.000 卵黄长径/mm yolk length (YL) 0.85±0.09b 0.98±0.09a 0.97±0.09a F2, 94=22.477, P=0.000 卵黄短径/mm Yolk depth (YD) 0.49±0.08b 0.48±0.05b 0.60±0.12a F2, 94=20.178, P=0.000 体全长/肛前长TL/PAL 2.23±0.06b 2.20±0.05b 2.27±0.08a F2, 94=8.524, P=0.000 体全长/肛后长TL/AL 1.82±0.04a 1.83±0.04a 1.79±0.05b F2, 94=7.963, P=0.001 体全长/头长TL/HL 4.92±0.24 4.97±0.26 4.92±0.26 F2, 94=0.477, P=0.622 体全长/体高TL/HD 5.90±0.68b 6.66±0.52a 5.05±0.58c F2, 94=53.810, P=0.000 头长/体高HL/BD 1.20±0.14b 1.34±0.13a 1.03±0.12c F2, 94=44.224, P=0.000 头长/眼径HL/ED1 2.23±0.12a 2.24±0.11a 2.11±0.13b F2, 94=10.388, P=0.000 头长/眼间距HL/ED2 1.27±0.12b 1.37±0.12a 1.24±0.06b F2, 94=14.767, P=0.000 头长/口宽HL/MW 2.84±0.17b 3.18±0.24a 3.18±0.18a F2, 94=31.671, P=0.000 眼间距/眼径ED2/ED1 1.76±0.11a 1.65±0.10b 1.71±0.10a F2, 94=9.420, P=0.000 肌节数sarcomere number 26.72±1.43ab 27.29±1.33a 26.21±1.19b F2, 94=4.992, P=0.009 背色素花数pigments in back 44.36±9.92a 32.18±7.94b 22.36±3.32c F2, 94=71.716, P=0.000 注:同一栏数值右上角所标字母不同者表示两者间差异具有统计学意义(P < 0.05)。 Note: Different letters in the same row indicate statistical significance (P < 0.05).

表 2 3种青鳉鱼类仔鱼形态性状差异比较 Tab.2 Morphological measurements among three Oryzias species hatching larvae

单因素方差分析。对3种青鳉鱼类仔鱼22组性状分析中发现它们在多数性状间存在显著性差异(占90.9%)(表 2), 但在两两比较中不同性状表现有所不同。在体全长、肛前长、肛后长及头长等性状上, 鳍斑青鳉仔鱼显著大于其余2种青鳉仔鱼。而弓背青鳉中与体高有关的性状则与其余2种青鳉仔鱼存在显著差异性, 如体长/体高、头长/体高等。中华青鳉仔鱼背色素花数目显著高于其余2种青鳉仔鱼。

主成分分析。在20组分析性状中共提取得到6个主成分, 共解释91.174%的变异, 其中前2个主成分共解释56.070%的变异: PC1=39.000%、PC2=17.070%, 其余主成分各测量参数的荷载较低。而为进一步观察仔鱼形态分离程度及主要的影响因素, 以主成分PC1对主成分PC2绘制散点图(图 5)。3种青鳉仔鱼分值点呈明显分离:在PC1轴上, 弓背青鳉仔鱼与鳍斑青鳉仔鱼明显区分, 体全长(0.915)、头长(0.929)、头长/体高(0.901)、体长/体高(0.878)、肛后长(0.836)、口宽(0.700)等是影响两种青鳉仔鱼形态差异的主要性状(在主成分PC1中荷载≥0.7)。进一步分析显示, PC2轴上中华青鳉与上述两种鳍斑青鳉仔鱼明显区分, 卵长径(0.759)是影响两类群青鳉仔鱼形态差异的主要性状(在主成分PC2中荷载 > 0.7)。

图 1(Fig. 1)

图 5 主成分分析PC1对PC2散点图 Fig.5 Scatter plots for the PC1 vs PC2

判别分析。在判别分析(Fisher判别)联合分布图上3种青鳉仔鱼得分组质心空间分布距离明显(图 6), 显示三者可以通过形态测量分析明显区分。函数标准化系数如表 3所示, 判别函数表达式可据此列出, 本文省略。判别函数对原始案例正确判别率为99.0%, 交叉验证正确判别率为92.8%。其中对中华青鳉仔鱼、鳍斑青鳉仔鱼及弓背青鳉仔鱼的正确判别率分别为100%、96.4%及100%。

图 1(Fig. 1)

图 6 判别分析联合分布图 Fig.6 Combine plots for discriminant analysis

表 3(Tab.3)

表 3 标准化的典型判别式函数系数 Tab.3 Standardized typical discriminant function coefficient 测量参数 measurement 函数function 1 2 肛前长/mm pre anal length (PAL) –3.847 –5.981 肛后长/mm anal length (AL) 3.754 0.648 头长/mm head length (HL) –1.093 4.96 头高/mm head depth (HD) 0.516 0.212 体高/mm body depth (BD) –0.177 0.517 眼径/mm eye diameter (ED1) –0.178 2.082 眼间距/mm eye distance (ED2) –0.628 0.813 口宽/mm mouth width (MW) 1.333 –1.25 卵长径/mm yolk length (YL) 0.121 –0.467 卵短径/mm yolk depth (YD) 0.029 –0.085 体长vs肛前长TL/PAL 0.89 –4.211 体长vs肛后长TL/AL 4.462 0.199 体长vs头长TL/HL 0.845 2.563 体长vs体高HL/BD –2.557 6.283 头长vs体高HL/BD 2.439 –6.251 头长vs眼径HL/ED1 1.031 0.998 头长vs眼间距HL/ED2 –1.792 3.25 头长vs口宽HL/MW 1.6 –2.314 眼间距vs眼径ED2/ED1 –0.943 1.845

表 3 标准化的典型判别式函数系数 Tab.3 Standardized typical discriminant function coefficient

单因素相似性分析(ANOSIM)。分析结果显示中华青鳉与鳍斑青鳉检验值R=0.47, P < 0.001;与弓背青鳉检验值R=0.841, P < 0.001;鳍斑青鳉与弓背青鳉检验值R=0.536, P < 0.001, 表明三者形态上均显著不相似, 且不同两者间比较有所差别。中华青鳉与弓背青鳉形态完全分离(R > 0.75), 鳍斑青鳉与弓背青鳉形态具有一定相似性但仍显著分离(0.5 < R≤0.75)。而中华青鳉与鳍斑青鳉形态具有较多相似但仍有部分分离(0.25 < R≤0.5)。

聚类分析。分析显示, 鳍斑青鳉初孵仔鱼与弓背青鳉仔鱼形态更为接近, 聚成一类, 而中华青鳉独成一类(图 7)。

图 1(Fig. 1)

图 7 青鳉鱼类初孵仔鱼形态聚类分析 Fig.7 Cluster analysis among three Oryzias species hatching larvae

青鳉初孵仔鱼均已基本具备开口摄食的生理结构及发育基础。其初孵仔鱼口裂形成并具有摄食功能, 消化道贯通, 且在鳔尚未充气的条件下已可以平游。这种特征提示与其他小型鱼类的比较中它们可能更具有生存竞争优势。在广州流溪河流域, 与弓背青鳉共同分布的唐鱼(Tanichthys albonubes)^[18-19]、叉尾斗鱼(Macropodus opercularis)^[20]、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)^[21]等仔鱼初孵时与摄食相关的器官及组织尚未发育, 至孵化后数天才在鳔充气的情况下具有平游能力并开始初步摄食。迅速摄食对仔鱼快速发育, 并形成较强逃避敌害能力有重要意义^{[10, 22]}。过去青鳉鱼类在沼泽、小型池塘等湿地生境中形成优势种群可能与这种发育特征关系密切, 越早进行摄食, 获得越高的生存机会^[23-24]。然而, 在与入侵种食蚊鱼的比较中, 青鳉鱼类初孵仔鱼并不具有优势。卵胎生鱼类食蚊鱼的初产仔鱼平均体长可达6.74 mm, 除腹鳍外, 其他外部形态已充分发育, 产出2 h即可开口摄食^[25], 且即可对其他小型鱼类如唐鱼初次摄食仔鱼进行捕食^[26]。初步的观察显示食蚊鱼初产仔鱼也能够对青鳉鱼类初孵仔鱼进行捕食, 则其整个生活史周期里均可对青鳉鱼类仔鱼进行捕食。因此, 食蚊鱼入侵对青鳉仔鱼的捕食压力十分明显, 初孵个体越大的青鳉仔鱼是否越具有生存优势尚需进一步观察分析。

仔鱼形态特征在仔鱼资源调查及资源发生量研究中常被用于物种鉴别^[27-29]。在青鳉鱼类已知分布区域中, 中国鱼类早期资源调查报道中迄今未见青鳉仔鱼的报道^[28], 这可能与青鳉鱼类主要生活于静水、较为狭窄生境, 过去研究采样区域未覆盖有关。

中华青鳉等3种青鳉鱼类初孵仔鱼形态极为相似, 但在细致的形态测量分析中发现三者在许多指标上存在显著差异, 且鳍斑青鳉仔鱼比其他2种青鳉鱼类仔鱼具有更大的个体。这一结果再次表明青鳉鱼类种间形态差异在初孵仔鱼期即具明显表现。与之类似, 如爪哇青鳉(O. javanicus)、湄公河青鳉(O. mekongensis)、小青鳉及恒河青鳉(O. dancena)^[13]等, 在初孵仔鱼期及稍后的仔鱼期已经显示出各自物种所具有的特征。在比较中, 中华青鳉初孵仔鱼背点状及星斑状色素花显著多于其余2个物种仔鱼, 其腹部覆盖于各主血管上的色花也明显比其余2个物种仔鱼多, 这可作为主要鉴别特征将其与其余两个物种仔鱼区分。这一特征, 鳍斑青鳉与弓背青鳉初孵仔鱼间并无显著区别, 它们的色素散落分布, 并无聚集于血管表面的现象。过去研究^[14]观察认为初孵仔鱼尾部色素花分布情况可作为鉴别鳍斑青鳉及弓背青鳉初孵仔鱼的主要鉴别特征, 鳍斑青鳉初孵仔鱼尾鳍中部及中上部具有数列色素花带, 但弓背青鳉初孵仔鱼没有。然而, 本文观察显示, 尽管鳍斑青鳉尾鳍色素花更多, 但其初孵仔鱼并没有出现上述特征, 这是否是种群间差异尚需进一步研究。弓背青鳉与鳍斑青鳉初孵仔鱼的鉴别可以通过胸鳍点状色素花的多寡进行, 鳍斑青鳉初孵仔鱼胸鳍点状色素花更多。点状及星斑状色素花出现部位及是否出现等性状也被应用于其他青鳉鱼类初孵仔鱼或仔鱼的物种鉴别中, 如上述的爪哇青鳉、湄公河青鳉、小青鳉及恒河青鳉等^[13]。

在初孵仔鱼形态聚类分析中, 弓背青鳉与鳍斑青鳉初孵仔鱼聚成一支, 中华青鳉初孵仔鱼独成一支。形态相似程度与种群地理空间分布距离远近一致, 可能弓背青鳉与鳍斑青鳉具有更近亲缘关系, 也可能是栖息生境相似产生进化趋同。中国青鳉鱼类地理分布区域尚少发现同域分布, 仅在广东怀集燕都国家湿地公园区域内发现了弓背青鳉及鳍斑青鳉具有同域分布现象^[4]。在分布上, 本研究中的3种青鳉在珠江流域均有分布, 但空间格局存在差异, 鳍斑青鳉分布在北江韶关曲江区、北江支流绥江怀集县、右江支流靖西县等地^[5]。而弓背青鳉分布在珠江口、流溪河、增江等区域, 也在北江支流绥江怀集县区域有分布^[4]。这2个物种主要分布在热带亚热带地区。中华青鳉则分布在珠江源头云南沾益西河, 异龙湖及弥勒等地, 且在云贵高原区域广泛分布。初孵仔鱼形态已初步揭示三者的亲疏, 但三者间亲缘关系尚待进一步研究。

对日本青鳉胚胎发育的研究显示, 在相同条件下同一批的胚胎孵出时间可以相差数天乃至3倍时间之久^[30]。本研究中也发现同样现象, 孵化越久的胚胎, 其卵黄含量越低, 相应的身体发育程度更为完善。这种发育程度差异会对外部形态特征的固定及判断带来误差。本文研究中以孵化后2 h内的形态特征为研究对象, 3个青鳉物种孵化、标本固定及其他观察条件均保持一致, 以尽量减少系统误差; 另一方面则在可量性状分析前将其与体长或头长作比, 以比例值进行数据分析, 可进一步以消除各可量性状参数因体长依赖所引起的系统误差。但是, 由于各物种所处的气候及栖息地条件差异, 特别是对最适宜水温的需求可能存在差异, 胚胎发育温度条件的变化也可能会对初孵仔鱼形态特征产生影响, 本文标准化研究条件下及比值化数据处理方法所得的研究结果应用于野外条件及其他区域种群时可能需要作验证性修正。在进一步的研究中可针对不同水温对各个物种胚胎发育及初孵仔鱼形态特征影响进行研究。尽管如此, 本文研究结果已经初步证实了3个青鳉物种初孵仔鱼存在可鉴别的形态特征差异, 进一步的研究中结合个体发育过程中形态差异的动态变化将有助深入了解中华青鳉等3个物种间形态分化特征差异。