阿根廷无须鳕(Merluccius hubbsi)为典型底层鱼类，分布于大西洋西南部沿海，即34°S~55°S之间的大陆架海域，栖息于50~400 m水深，主要栖息于100~200 m深的海域^[1]。阿根廷无须鳕为洄游性鱼类，按照纬度可分为5个群体，阿根廷北部群体是最大的阿根廷无须鳕群体，秋季(3—5月)于42°S~45°S之间水深100 m左右拉普拉塔河口的浅水水域产卵，随后在大陆架斜坡较深水域进行索饵洄游^[2]。目前阿根廷无须鳕是西南大西洋海域最主要捕捞对象之一^[3]，近年来，其捕捞产量持续上涨，从2017年的35.6万t到2021年达到了41.5万t，是该海域重要的经济物种之一。

异尖线虫(Anisakid larvae)是线虫动物(Nematoda)中的重要物种之一，是目前海洋鱼类的主要寄生线虫类群。异尖科线虫主要通过食物链进行传播，其虫卵在海水中经过一次蜕皮孵化出第二期幼虫(L₂)，这些幼虫可被第一中间宿主甲壳动物所吞食，并发育为第三期幼虫(L₃)，磷虾是异尖科线虫生活史中的关键宿主；鱼类或头足类等第二中间宿主通过摄食感染了异尖线虫L₃期幼虫的磷虾或小鱼而被感染；最后，异尖科线虫则通过食物链寄生于海洋鱼类、海洋哺乳动物或食鱼鸟类等终末宿主的胃肠道中^[4]。由于该类线虫可通过食用生的、未煮熟的鱼而感染人类，引发人畜共患疾病^[5]，称为异尖线虫病(Anisakiasis)。

近年来，关于海洋鱼类感染异尖科线虫的研究越来越多，Abollo等^[6]调查了西班牙西南部加利西亚水域鱼类的寄生线虫，在2673尾共35种头足类和鱼类的样本中鉴定到两种异尖科线虫，即简单异尖线虫(Anisakis simplex)和派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii); Farjallah等^[7]调查了突尼斯地中海东部海岸欧洲褐鳕感染线虫幼虫的情况，结果显示在592个样本宿主中共检测出4种异尖科线虫；马宏伟等^[8]对渤海鱼类和头足类异尖科线虫幼虫感染情况进行了调查，结果在19种鱼和1种头足类的样本上共检测到6种异尖线虫幼虫，共计7327条；叶丽萍等^[9]于2004—2005年对我国东海采集的23种鱼类及软体动物感染异尖线虫幼虫的情况进行了调查，在大量样本中检测出异尖线虫属L₃期幼虫。然而，对于西南大西洋海域阿根廷无须鳕感染寄生虫的研究还较少。目前Herreras等^[10]报道了阿根廷无须鳕肌肉组织感染异尖线虫属L₃期幼虫的情况，结果显示，阿根廷无须鳕肌肉中感染异尖线虫幼虫的数量与其体长和体重没有显著的相关性，但腹侧肌肉中感染异尖线虫的数量显著高于背侧肌肉，这对降低人类感染异尖线虫的风险提供了方向。对西南大西洋海域阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的进一步了解，有助于对阿根廷无须鳕渔获物进行食品安全评估，以及进一步研究寄生虫的感染是否影响宿主生长发育。为此，本研究针对2022年10月至2023年2月于西南大西洋所捕捞的阿根廷无须鳕进行解剖实验，调查感染寄生虫的情况，分析感染强度与性腺成熟度、感染部位以及叉长体重之间的关系，为后续异尖科线虫的寄生生活史和影响驱动因素研究打下基础。

依托我国拖网船于2022年10月至2023年2月，在阿根廷及马尔维纳斯群岛(福克兰群岛)专属经济区外的公海海域进行捕捞作业，共捕获435尾渔获样本，所获得样本于−20 ℃冷冻保存，待运回实验室后进行解剖实验。

将冷库中的样本鱼提前进行解冻，测量叉长和体重，鉴定性别和性腺成熟度，待第二步寄生虫的采集完毕后还要称量肝重和胃重。

对样本鱼进行解剖，从不同感染部位采集寄生虫并进行标记和计数，将采集到的寄生虫用纯净水洗净，置于70%乙醇溶液中加热至约70 ℃固定虫体，再将其置于甘油透明液中使其透明，方便后续进行显微镜观察^[11]。

将采集到的寄生虫从透明液中取出放置载玻片上进行显微镜观察，拍摄形态图方便后续进行形态鉴定，最后对寄生虫的体长和体宽进行测量。

根据《水生动物寄生虫学》^[4]进行形态学分析，异尖线虫幼虫呈乳白色盘曲状，虫体头部钝圆，头端腹侧有一钻齿，尾部尖锐，除对盲囊线虫属以外尾部末端都具有尾突。异尖线虫L₃期幼虫体长在1.5~50.0 mm之间，体宽在0.05~1.2 mm之间。由于对幼虫时期的虫体鉴定需要借助其他方法(如分子生物学方法)，并且形态学鉴别具有一定的局限性，因此本研究仅将幼虫鉴定到科进行后续研究。

根据上述获得的样本和相关数据，按照以下公式计算感染率、平均感染强度^[12]:

定量数据以平均值±标准差($\bar x \pm {\rm{SD}}$)表示，叉长-体重采用Origin2021绘制拟合函数图像，描述拟合程度。采用SPSS27.0对实验数据进行描述性统计分析，不同性腺成熟度之间感染强度的关系进行单因素方差分析，先进行单因素ANOVA检验，检验结果为：方差不齐，后取对数进行数据转换，符合等方差再进行LSD检验，显著性水平P=0.05。不同部位感染强度经检验不符合正态分布的样本数据则进行塔姆黑尼检验，显著性水平P=0.05。叉长、体重与感染强度之间的相关性以及肝重与肝脏感染强度之间的相关性分析，经检验不符合正态分布则采用Spearman相关性进行相关性分析。得出结果采用Origin 2021进行图表的绘制。

所采集的阿根廷无须鳕样本叉长平均值为(316.26±57.78) mm，体重的平均值为(278.97± 187.82) g，叉长-体重的拟合曲线函数为W= 9.378×10^-6L^2.971 (N=435, R²=0.8140, P<0.001) (图1)，样本鱼叉长与体重之间呈现显著的正相关关系。不同性成熟度之间的样本量，雌雄比以及生物学数据见表1。采用Spearman相关性进行相关性分析，得出性成熟度与样本鱼叉长之间的相关系数ρ=0.536 (P<0.01)，说明本实验所采集样本鱼叉长与性腺成熟度之间也具有一定的正相关关系。

表1

表1 　不同性成熟度阿根廷无须鳕的生物学数据 Tab. 1 　Biological data of Merluccius hubbsi at different levels of sexual maturity 性腺 成熟度 sexual maturity 样本量/ ind sample number 叉长平 均值/mmfork length 体重 平均值/g body mass 雌雄比sex ratio I 46 277.17±25.09 161.33±43.16 Ⅰ期不分雌雄 II 241 297.64±40.83 219.92±105.15 0.37 III 115 346.55±54.37 364.17±178.33 0.62 IV 33 407.58±72.92 605.09±342.73 0.06

表1 　不同性成熟度阿根廷无须鳕的生物学数据 Tab. 1 　Biological data of Merluccius hubbsi at different levels of sexual maturity

图1

图1 　阿根廷无须鳕叉长-体重之间的关系 Fig. 1 　The relationship between fork length and body mass in Merluccius hubbsi

将从阿根廷无须鳕样本上采集的寄生虫进行显微镜观察和体长体宽的测量，结果显示，从435尾样本鱼中共采集到8438条寄生虫，肉眼观测虫体呈现乳白色卷曲盘状(图2)。在显微镜下观测，虫体前端钝圆，头部顶端有一钻孔齿，尾部有明显横纹和尾突(图3)，与异尖线虫幼虫形态相符^[4]。通过测量，所采集的异尖科线虫体长范围在8.04~28.57 mm之间，体宽范围在0.14~0.66 mm之间，属于异尖线虫L₃期幼虫阶段^[4]。

图2

图2 　从阿根廷无须鳕上采集到的寄生虫 Fig. 2 　Parasites collected from Merluccius hubbsi

图3

图3 　异尖线虫幼虫头部及钻齿(左)；异尖线虫幼虫尾部及尾突(右) Fig. 3 　Anisakid larvae head and drill teeth (left); anisakid larvae tail and caudal process (right)

从435尾阿根廷无须鳕样本鱼上采集的8438条寄生虫均为异尖线虫幼虫，其感染率高达99.08%，平均感染强度为(19.56±24.76)条/尾。其中，感染强度在1~10条/尾的样本鱼数量所占比例最高，占样本总数的44.37% (图4)。大多数样本个体所寄生的异尖线虫幼虫的条数都在1~20条之间，所有样本鱼中仅有4尾阿根廷无须鳕没有感染异尖线虫幼虫，感染异尖线虫幼虫的数量超过80条的有11尾，其中感染强度最高的一尾鱼共寄生了256条异尖线虫幼虫。

图4

图4 　阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的频率分布情况 Fig. 4 　Distribution of frequency of anisakid larvae infection in Merluccius hubbsi

如图5所示，性腺成熟度分别为I~IV的阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的平均感染强度分别为(9.89±10.67)条/尾、(13.83±14.74)条/尾、(25.86± 22.17)条/尾、(50.61±56.78)条/尾。通过对不同性腺成熟度下样本鱼感染异尖线虫幼虫数量取对数进行参数检验，结果显示，性腺成熟度为III和IV期的阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的平均感染强度显著高于性腺成熟度为I期和II期的样本鱼；性腺成熟度为Ⅳ期的样本鱼异尖线虫幼虫的平均感染强度显著高于性腺成熟度的为III期的样本鱼；性腺成熟度为I、II期的样本鱼之间感染异尖线虫幼虫的差异不显著(P<0.05)(图5)。

图5

图5 　不同性成熟度的样本鱼平均感染强度的差异不同字母表示不同性成熟度之间存在显著差异性(P<0.05). Fig. 5 　Differences in the mean intensity between sample fish of different sexual maturity levelsDifferent letters indicate significant differences between different sexual maturity (P<0.05).

经过对阿根廷无须鳕的解剖实验，发现样本鱼的腹腔、肝脏、胃、肠道、幽门盲囊和性腺等部位都存在寄生异尖线虫幼虫的情况，从腹腔、肝脏和胃中共检测出8431条异尖线虫幼虫，而从肠道、幽门盲囊和性腺等部位采集到的异尖线虫幼虫仅7条，占采集异尖线虫幼虫总数的1%不到，因此本研究主要研究腹腔、肝脏和胃这3个主要感染部位。从腹腔中共检测出3669条；肝脏上检测出3316条；胃中检测出1446条。其中91.72%的样本鱼腹腔内都感染了异尖线虫幼虫，平均感染强度为(9.20±10.01)条/尾；88.51%的样本鱼肝脏上感染寄生虫，平均感染强度为(8.61±13.74)条/尾；76.55%的样本鱼胃内检测出异尖线虫幼虫，平均感染强度为(4.34±5.10)条/尾(图6)。

图6

图6 　不同感染部位之间平均感染强度的差异不同字母表示不同感染部位之间存在显著差异性(P<0.05). Fig. 6 　Differences in the mean intensity of infection between sites of infectionDifferent letters indicate significant differences between sites of infection (P<0.05).

由于不同部位感染强度之间的差异方差齐性检验结果为显著，拒绝原假设，则在事后多重比较中需要采用塔姆黑尼检测。结果显示，阿根廷无须鳕腹腔与肝脏之间感染异尖线虫幼虫的平均感染强度差异不显著(P=0.874>0.05)。而肝脏和腹腔感染异尖线虫幼虫的平均感染强度却显著高于胃的平均感染强度(P<0.05)。

根据Spearman相关性进行相关性分析，得出阿根廷无须鳕的叉长与寄生虫感染数量的相关系数R²=0.591 (P<0.001)，说明阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的数量与其叉长之间具有较显著的正相关关系。阿根廷无须鳕的体重与异尖线虫幼虫感染数量的相关系数R²=0.619 (P<0.001)，说明阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的数量与其体重之间也具有较显著的正相关性。同时，阿根廷无须鳕的肝重与肝脏感染异尖线虫幼虫的数量之间的相关系数R²=0.526 (P<0.001)，说明肝重与肝脏感染异尖线虫幼虫的强度之间同样具有一定的正相关性。

异尖科线虫通过在不同营养级之间的传播完成其生活史，依靠大量的宿主生物量、稳定的生态系统以及适宜的环境条件进行种群扩大^[13-14]。本研究所采样的海域为阿根廷及马尔维纳斯群岛(福克兰群岛)专属经济区外的公海海域，位于南大西洋巴塔哥尼亚大陆架，该大陆架是南半球最庞大，初级生产力最高的生态系统之一^[15]。受福克兰寒流的影响，马尔维纳斯群岛(福克兰群岛)温度随着维度的升高而降低，而异尖科线虫适宜低温的水域^[16]，在该海域内，阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的感染率随着纬度的升高而上升，在44°S~46°S之间，阿根廷无须鳕异尖线虫幼虫的感染率可以达到100%^[17]。本研究于2022年10月至2023年2月捕捞的阿根廷无须鳕中检测出异尖线虫幼虫感染率高达99.08%。根据本研究展示了西南大西洋阿根廷无须鳕异尖线虫幼虫感染率较高的现状，这种高感染率的情况不仅与宿主本身有关，还与非生物因素(温度、水深、渔场等)密切相关。

根据结果显示，阿根廷无须鳕异尖线虫幼虫的感染强度随着样本鱼性腺成熟度的升高而显著上升。性腺成熟度为Ⅳ期的阿根廷无须鳕异尖线虫幼虫平均感染强度达到(50.61±56.78)条/尾，显著高于性腺成熟度为I-III期的样本鱼。有许多研究结果显示宿主对寄生虫的感染率与宿主叉长或者体重之间存在正相关关系^[18-21]，本实验样本中，成熟度与叉长之间也存在显著的正相关关系，叉长越长，性腺成熟度越高，感染异尖线虫幼虫的感染强度越高，这也一定程度上印证前人的研究^[19-20]。成熟度越高的宿主，感染率越高，是由于在其生命周期中寄生虫不断积累所致^[22-23]。异尖科线虫属于食源性寄生虫，在生态系统内的传播主要依靠食物网。阿根廷无须鳕作为异尖科线虫的中间宿主，在营养级中处于较高的水平，虽然仅感染异尖线虫L₃期幼虫，但异尖科线虫在其体内存活期限可以跨越阿根廷无须鳕的整个生命周期，所以通过不断摄食，寄生虫会在其体内也不断积累^[22]。本研究结果与Mattiucci等^[24], Cavallero等^[25]的研究结果相符。

本研究中，异尖线虫幼虫主要寄生在阿根廷无须鳕的肝脏、腹腔和胃中。在腹腔中，异尖线虫幼虫常黏附于性腺系膜或者性腺与肝脏之间的系膜上，无包囊。异尖线虫幼虫在肝脏上以螺旋状盘绕，被囊并且嵌入肝脏表面。由于肝脏富含丰富的脂肪和蛋白质，是寄生虫最常寄生部位之一，根据本研究结果显示肝重与肝脏感染异尖线虫幼虫的数量之间存在一定的正相关关系(R²= 0.526)，肝脏越重异尖线虫幼虫的寄生面积越大，并且更容易嵌入肝脏组织内^[26]。在胃内异尖线虫幼虫常附着于胃壁，由于异尖线虫是食源性寄生虫，其传播主要通过摄食进行，所以胃也是其主要寄生部位之一。但是相对于腹腔和肝脏，异尖线虫幼虫寄生于胃中的数量偏低，腹腔和肝脏能够寄生的面积相对于胃更大，并且胃中会分泌大量消化液，不利于异尖线虫幼虫的生存。

本研究初步阐述了西南大西洋夏季阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的情况，经过初步分析，阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的数量与样本鱼的性腺成熟度和不同感染部位有关，并且感染数量的增加与样本鱼叉长的增长和体重的增加具有相关性。在本实验的过程中还经常在腹腔末端发现大量异尖线虫幼虫被包裹在一起的现象，Cipriani等^[27]学者猜测可能与宿主死后肝脏、胃等发生物理或者化学变化有关，刺激异尖线虫幼虫向末端运动，最终发生集群现象。还有学者表示^[28]一些信号分子能够引导异尖线虫幼虫的扩散或者迁移，比如在宿主死后线虫对其他线虫释放一种聚集信号，导致聚集现象^[29]。由于缺少活体样本，关于是环境因素还是生物因子导致这一现象的发生这一科学问题在本研究中并不能得到验证，需要在后续研究中进行。除此以外，基于异尖线虫幼虫的感染是否影响宿主营养成分以及食用感染异尖线虫幼虫的阿根廷无须鳕是否影响人类健康等方面的研究还较少。随着经济发展和人类消费水平的改变，在近几十年，人们对于鱼类的人均消费量几乎翻了一倍，特别是对于生食海鲜的质量要求越来越高^[30]，鱼类感染异尖线虫幼虫存在导致人畜共患病的食品安全风险逐渐被人们重视，另外，经济价值较高的鱼类感染寄生虫后，会影响美观和销售价值。因此在后续的研究中，主要从以下两个方面开展研究影响阿根廷无须鳕感染异尖线虫幼虫的驱动因素：一方面是探究温度、盐度和叶绿素等环境因素的影响，这些非生物因素可能会影响虫卵的孵化和幼虫的存活和扩散，其中包括上升流、下沉流和涡旋等特殊的水体活动的影响；另一方面是探究宿主所在渔场种群是否影响异尖线虫幼虫的感染，寄生虫的传播依靠不同营养级的生物之间的相互作用，宿主的种群分布、营养结构和迁移路线都会影响寄生虫的种群动态，而海洋生态系统营养网的稳定性是维持这种复杂动态的必要条件。