本研究旨在从南极磷虾基因转录组中筛选克隆获得一种亮氨酸氨肽酶基因EsLAP,构建重组表达载体EsLAP-pET-28a,并借助分子伴侣在大肠杆菌中实现其可溶性表达。利用三因素三水平响应面法对诱导条件进行优化,并对重组酶酶学性质进行了研究。EsLAP基因全长1569 bp,编码522个氨基酸,理论分子量(MW)为55302.67 Da,等电点(pI)为6.16。序列与结构分析表明,EsLAP具有M17家族肽酶的典型肽酶催化结构域及底物特异性结合位点。EsLAP最佳表达条件为：IPTG浓度0.7 mM、接种量3%、诱导时间19 h。酶学性质分析显示,EsLAP最适反应温度为60 ℃,最适pH为8.5,其中粗酶酶活为265.6 U/mL,比酶活为33.15 U/mg。金属离子Co2+^和Mn2+^{可显著增强酶活},其中Co2+^{可使酶活提高至原始水平的}296%。EDTA可以显著抑制其酶活,表明EsLAP是金属蛋白酶。β-mercaptoethanol、NaBH4、DTT等强还原剂显著抑制酶活,可以使剩余酶活降低至10%以下。底物特异性研究表明,EsLAP对Leu-pNA的降解效率最好,表明其为亮氨酸氨肽酶。本研究首次报道南极磷虾来源的亮氨酸氨肽酶的克隆表达及酶学特性,相关结果为其在食品与医药工业中用于降解N-端含亮氨酸的功能肽提供了潜在应用基础。